Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CCDC109A Plasmide Double Nickase (h): sc-413850-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CCDC109A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CCDC109A Double Nickase Plasmid (h) e il CCDC109A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MCU. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CCDC109A Antibody (E-9): sc-515930
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CCDC109A Plasmide Double Nickase (h) | sc-413850-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CCDC109A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-413850-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MCU (CCDC109A) codifica la subunità che forma il poro del complesso uniporter del calcio mitocondriale, responsabile dell’ingresso di Ca²⁺ attraverso la membrana mitocondriale interna. Modellando i transienti di Ca²⁺ mitocondriale, MCU collega la segnalazione citosolica alla fosforilazione ossidativa, all’attivazione delle deidrogenasi del ciclo TCA e all’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno, influenzando la produzione di ATP e la flessibilità metabolica. La gestione del Ca²⁺ dipendente da MCU interagisce anche con la transizione di permeabilità mitocondriale e con vie correlate all’apoptosi, incidendo sulle risposte allo stress e sulle decisioni di destino cellulare. Un’attività di MCU deregolata è stata associata ad alterazioni della bioenergetica e della segnalazione del Ca²⁺ in contesti che includono disfunzioni cardiometaboliche, neurodegenerazione e biologia tumorale, rendendolo un bersaglio frequente negli studi meccanicistici sulla segnalazione mitocondriale.
CCDC109A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MCU nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MCU. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MCU. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MCU interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.