CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401054-ACT

CNR2 codifica il recettore cannabinoide 2 (CB2), un GPCR accoppiato a Gi/o espresso prevalentemente nelle linee cellulari immunitarie ed ematopoietiche, che modula il tono infiammatorio e la migrazione delle cellule immunitarie. In seguito all’attivazione, CB2 inibisce l’adenilato ciclasi riducendo la segnalazione cAMP/PKA e può attivare le vie MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando la produzione di citochine, la chemiotassi e i programmi di sopravvivenza cellulare. La segnalazione di CB2 interseca le reti dei mediatori lipidici e il metabolismo degli endocannabinoidi, condizionando gli stati di attivazione di macrofagi e microglia e, più in generale, le risposte immunitarie innate e adattative. Un’espressione o una segnalazione di CNR2 deregolate sono state associate a infiammazione immunomediata, processi neuroinfiammatori e dinamiche del microambiente tumorale–immunitario, a supporto della sua utilità come bersaglio meccanicistico nella ricerca in immunologia e neurobiologia.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CNR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CNR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CNR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CNR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 nelle cellule tumorali con espressione di CNR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.