caveolin-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400102-ACT

Il gene umano **CAV1** codifica la caveolina-1, una proteina integrale di membrana con funzione di “scaffold”, essenziale per la formazione delle caveole e per l’organizzazione dei lipid raft ricchi di colesterolo nella membrana plasmatica. La caveolina-1 coordina la trasduzione del segnale e il traffico di membrana modulando le tirosin-chinasi recettoriali, la segnalazione dei GPCR, l’adesione dipendente dalle integrine e vie a valle come PI3K–AKT, MAPK e la segnalazione eNOS/NO. Attraverso ruoli nell’endocitosi, nella meccanotrasduzione e nel rimodellamento del citoscheletro, **CAV1** influenza proliferazione, migrazione e omeostasi metabolica in molti tipi cellulari. Alterazioni dell’espressione di caveolina-1 e della dinamica delle caveole sono state collegate alla biologia del cancro, alla fibrosi, alla disfunzione cardiovascolare e alla resistenza all’insulina, rendendolo un nodo utile per l’analisi delle vie di segnalazione in modelli rilevanti per la malattia.

caveolin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CAV1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

caveolin-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CAV1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CAV1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di caveolin-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CAV1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da caveolin-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via caveolin-1 nelle cellule tumorali con espressione di CAV1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.