cathepsin S Plasmide Double Nickase (h): sc-417407-NIC

CTSS codifica per la catepsina S, una proteasi cisteinica lisosomiale con una marcata attività nelle cellule presentanti l’antigene, dove scinde la catena invariante (CD74) per consentire il caricamento dei peptidi su MHC di classe II e la sorveglianza immunitaria. Oltre al turnover proteico endolisosomiale, la catepsina S contribuisce al rimodellamento della matrice extracellulare e modula la segnalazione infiammatoria attraverso la proteolisi di mediatori immunitari. Un’espressione o un’attività deregolata di CTSS è stata associata a un’alterata presentazione dell’antigene, a microambienti infiammatori cronici e a interazioni immunitarie associate al tumore, rendendolo un nodo utile per studiare l’immunoregolazione e le vie dipendenti dalle proteasi. CTSS è inoltre oggetto di studio in contesti di neuroinfiammazione e patologia vascolare, in cui una proteolisi aberrante può influenzare l’omeostasi tissutale.

cathepsin S Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CTSS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CTSS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CTSS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CTSS interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.