cathepsin K Plasmide Double Nickase (h): sc-400673-NIC

CTSK codifica per la catepsina K, una proteasi cisteinica lisosomiale con elevata attività collagenolitica ed elastolitica, che sostiene il turnover della matrice extracellulare durante il riassorbimento osseo mediato dagli osteoclasti. Partecipa alla proteolisi endolisosomiale e a programmi di rimodellamento collegati alla differenziazione degli osteoclasti e a reti di segnalazione come le vie guidate da RANK/RANKL. Un’alterata attività di CTSK è associata a fenotipi scheletrici e del tessuto connettivo, e un’espressione disregolata è stata riportata nello stroma associato ai tumori e in microambienti infiammatori, dove la degradazione della matrice contribuisce al rimodellamento tissutale. CTSK è quindi ampiamente utilizzato come marcatore funzionale e nodo meccanicistico per studi sulla biologia degli osteoclasti, la dinamica della matrice e la segnalazione regolata dalle proteasi.

cathepsin K Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CTSK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CTSK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CTSK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CTSK interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.