CASC3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411606-ACT

CASC3 (nota anche come MLN51) codifica un componente fondamentale del complesso di giunzione degli esoni (exon junction complex, EJC), che viene depositato sull’mRNA dopo lo splicing e coordina la regolazione genica post-trascrizionale. Attraverso interazioni con fattori quali EIF4A3, MAGOH e RBM8A, CASC3 contribuisce alla sorveglianza dell’mRNA e al decadimento mediato da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated mRNA decay, NMD), influenzando la stabilità dei trascritti, l’esportazione e la traduzione. Queste funzioni collocano CASC3 all’interno di vie che controllano il controllo qualità dell’RNA e l’omeostasi del proteoma, con effetti a valle su programmi dello stato cellulare, inclusi proliferazione e differenziamento. La disregolazione dell’attività dell’EJC e del decadimento dell’mRNA è stata associata a firme di espressione genica aberranti osservate in molteplici contesti patologici, a supporto dell’impiego di CASC3 come nodo meccanicistico per studi di biologia dell’RNA.

CASC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CASC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CASC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CASC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CASC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CASC3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CASC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CASC3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CASC3 nelle cellule tumorali con espressione di CASC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.