CARM1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404087-NIC

CARM1 (PRMT4) è una metiltransferasi delle arginine proteiche che catalizza la dimetilazione asimmetrica dell’istone H3 e di substrati non istonici, coordinando il controllo epigenetico della trascrizione. Attraverso la metilazione di coattivatori trascrizionali e di fattori associati alla cromatina, CARM1 integra segnali a monte in programmi che regolano la progressione del ciclo cellulare, la specificazione di linea e l’elaborazione dell’RNA. Opera in vie di regolazione trascrizionale legate alla segnalazione dei recettori nucleari, alla coattivazione del recettore degli estrogeni e a complessi di rimodellamento della cromatina che modellano l’attività di enhancer e promotori. Un’espressione o un’attività deregolate di CARM1 sono state associate a stati trascrizionali oncogenici e a programmi di differenziamento alterati, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici in biologia del cancro e nei sistemi di sviluppo.

CARM1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CARM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CARM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CARM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CARM1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.