Carbonyl reductase 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402755-NIC

Il gene umano CBR1 codifica la carbonil reduttasi 1, un’ossidoreduttasi citosolica NADPH-dipendente che catalizza la riduzione di aldeidi e chetoni reattivi nei corrispondenti alcoli. Questo enzima contribuisce all’omeostasi redox cellulare e alla detossificazione, processando specie carboniliche endogene generate durante lo stress ossidativo e la perossidazione lipidica, oltre a numerosi substrati xenobiotici. Attraverso queste attività, CBR1 si inserisce nelle risposte allo stress metabolico e influenza la sensibilità cellulare al carico di composti carbonilici. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di CBR1 sono state studiate in contesti di infiammazione, disregolazione metabolica e biologia tumorale, in cui lo stress carbonilico e le vie del metabolismo dei farmaci possono influenzare il fenotipo.

Carbonyl reductase 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CBR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CBR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CBR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CBR1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.