CaMKIV Plasmide Double Nickase (h): sc-400806-NIC

CAMK4 codifica la protein chinasi IV calcio/calmodulina-dipendente (CaMKIV), una chinasi serina/treonina che trasduce i segnali di Ca2+ dalla calmodulina ai programmi di trascrizione nucleari. CaMKIV viene attivata a valle di CaMKK e regola la fosforilazione di fattori di trascrizione come CREB e MEF2, collegando la dinamica del calcio all’espressione genica, alla plasticità neuronale e alla differenziazione dipendente dall’attività. La chinasi partecipa a vie che controllano l’attivazione delle cellule immunitarie e le risposte trascrizionali legate alle citochine, e la sua disregolazione è stata studiata in contesti che includono fenotipi del neurosviluppo e neuropsichiatrici, nonché disturbi associati al sistema immunitario. In quanto regolatore nucleare sensibile al Ca2+, CaMKIV è spesso utilizzata per indagare la trascrizione accoppiata allo stimolo e la segnalazione associata alla cromatina in modelli cellulari umani.

CaMKIV Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAMK4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAMK4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAMK4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAMK4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.