BVES CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403698-ACT

BVES（blood vessel epicardial substance。別名POPDC1）は、心筋組織および上皮組織に豊富に発現する膜結合性タンパク質をコードし、cAMP結合性の細胞間接着および膜輸送の調節因子として機能します。BVESは、接着結合の組織化や細胞骨格の再構築に関与し、上皮の完全性、遊走、ならびに横紋筋における電気伝導表現型に影響を与えます。cAMP依存的シグナル伝達の調節と、それに伴う足場タンパク質との相互作用を介して、BVESは組織の恒常性維持やストレス応答に寄与します。BVESの発現量や局在の変化は、上皮バリア機能の障害や心臓の伝導異常に関連する表現型と結び付けられており、心筋症や上皮機能異常に関連する経路の機序研究における重要性を裏付けています。

BVES CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BVESの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BVES CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BVES 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBVES転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BVESの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBVES遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBVES依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBVES発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBVES経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。