BRWD1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405121-ACT

BRWD1 umano (bromodomain and WD repeat domain-containing 1) codifica una proteina nucleare associata alla cromatina che integra il riconoscimento dell’acetil-lisina dipendente dal bromodominio con interazioni proteina-proteina mediate da ripetizioni WD, influenzando i programmi trascrizionali. BRWD1 è stato implicato nel controllo epigenetico dell’espressione genica, con ruoli riportati nella regolazione specifica di linea cellulare e nel coordinamento dell’accessibilità della cromatina durante le transizioni di stato cellulare. Attraverso queste funzioni, BRWD1 può incidere su vie legate alla progressione del ciclo cellulare, alla differenziazione e alla regolazione del genoma. Un’attività o un’espressione deregolata di BRWD1 è studiata nel contesto di reti trascrizionali alterate osservate nel cancro e in fenotipi correlati al sistema immunitario, a supporto della sua rilevanza per indagini meccanicistiche.

BRWD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BRWD1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BRWD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BRWD1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BRWD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BRWD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BRWD1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BRWD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BRWD1 nelle cellule tumorali con espressione di BRWD1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.