BPAG1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403388-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BPAG1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BPAG1 Double Nickase Plasmid (h) e il BPAG1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DST. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BPAG1 Antibody (1B10): sc-293499
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BPAG1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403388-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BPAG1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403388-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La distonina (DST), nota anche come BPAG1, codifica una grande proteina di collegamento del citoscheletro della famiglia delle plakine, che connette i filamenti intermedi all’actina, ai microtubuli e ai complessi giunzionali associati alla membrana. In contesti epiteliali e neuronali, BPAG1 sostiene l’integrità degli emidesmosomi, l’adesione cellula–matrice e l’organizzazione del citoscheletro, influenzando così la polarità cellulare, la migrazione e la resistenza allo stress meccanico. Le isoforme di DST partecipano a processi coordinati di reticolazione del citoscheletro e di traffico intracellulare che incidono sull’architettura tissutale e sulla stabilità assonale. L’alterazione genetica o l’espressione anomala di DST è stata associata a fenotipi di cute bollosa e a caratteristiche neurodegenerative, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio dei meccanismi di cedimento del citoscheletro e della biologia delle giunzioni.
BPAG1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DST nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DST. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DST. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DST interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.