BNP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402447-ACT

Il gene umano **NPPB** codifica il peptide natriuretico di tipo B (**BNP**), un ormone di origine cardiaca prodotto principalmente dai cardiomiociti ventricolari in risposta a un aumento dello stress di parete. Dopo la processazione del pro-ormone, il BNP segnala attraverso il recettore A dei peptidi natriuretici (NPR1/GC-A) aumentando i livelli di cGMP e attivando vie dipendenti da PKG che modulano la vasodilatazione, la natriuresi e programmi genici anti-fibrotici. La trascrizione di NPPB integra input biomeccanici e neuro-umorali, inclusi segnali calcio-dipendenti e cascate MAPK, collegando il carico emodinamico a cambiamenti coordinati nel rimodellamento miocardico. Un’espressione deregolata di NPPB/BNP è ampiamente utilizzata come indicatore molecolare di stress cardiaco ed è studiata in contesti quali ipertrofia, fibrosi e biologia dello scompenso cardiaco.

BNP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NPPB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BNP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NPPB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NPPB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BNP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NPPB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BNP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BNP nelle cellule tumorali con espressione di NPPB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.