Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Bmi-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-417606-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Bmi-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Bmi-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Bmi-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BMI1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Bmi-1: sc-390443
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Bmi-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Bmi-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BMI1 kodiert Bmi-1, einen Transkriptionsrepressor der Polycomb-Gruppe und eine Kernkomponente des PRC1-Komplexes, der die Ubiquitinierung von Histon H2A katalysiert und so eine stabile Genstilllegung aufrechterhält. Bmi-1 trägt zur Selbsterneuerung von Stamm- und Vorläuferzellen bei, indem es den CDKN2A-Lokus (p16INK4A/p14ARF) reprimiert und Prozesse wie Seneszenz, Differenzierung und DNA-Schadensantworten moduliert. Durch Chromatinkondensation und epigenetische Kontrolle beeinflusst BMI1 den Zellzyklusverlauf, die mitochondriale Funktion und die Toleranz gegenüber oxidativem Stress. Eine fehlregulierte BMI1-Expression ist häufig mit veränderter Proliferationsfähigkeit und gestörten Linienprogrammen bei Krebs und anderen Erkrankungen verbunden, die mit epigenetischer Instabilität einhergehen.
Bmi-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BMI1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BMI1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BMI1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BMI1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.