BIGM103 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-426620-LAC

Slc39a8 codifica il trasportatore di ioni metallici ZIP8, che media l’ingresso cellulare di cationi bivalenti quali manganese e zinco e contribuisce a mantenere l’omeostasi intracellulare dei metalli. Attraverso la regolazione della disponibilità di manganese, ZIP8 può influenzare l’attività di enzimi Mn-dipendenti, incluse le vie di glicosilazione e processi metabolici e redox più ampi che modellano le risposte cellulari allo stress. Una funzione alterata di SLC39A8/ZIP8 è stata collegata in letteratura alla segnalazione infiammatoria, a fenotipi neuroevolutivi e a tratti metabolici, in linea con il ruolo centrale del trasporto di micronutrienti nella fisiologia dei tessuti. Nei sistemi murini, Slc39a8 rappresenta quindi un nodo utile per studiare la regolazione, dipendente dai metalli, di programmi di segnalazione ed espressione genica rilevanti per meccanismi associati alle malattie.

Le particelle di attivazione lentivirale BIGM103 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Slc39a8 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BIGM103 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Slc39a8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BIGM103. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Slc39a8 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.