Biglycan Plasmide Double Nickase (h): sc-401408-NIC

BGN codifica per biglicano, un piccolo proteoglicano ricco di leucina della matrice extracellulare che regola la fibrillogenesi del collagene, l’organizzazione della matrice e la biomeccanica dei tessuti. Il biglicano lega fattori di crescita e recettori di superficie cellulare, influenzando vie di segnalazione come TGF-β, Wnt/β-catenina e le risposte infiammatorie mediate dai recettori Toll-like, che modellano adesione, migrazione e differenziamento cellulare. Alterazioni dell’espressione di BGN e il rimodellamento dei proteoglicani sono associati a fibrosi, rimodellamento vascolare e cardiaco, degenerazione osteoarticolare e interazioni tumore–stroma, rendendo BGN un nodo utile per studiare la segnalazione cellulare guidata dalla ECM e la meccanobiologia. Nei sistemi umani, BGN è spesso utilizzato come marcatore e mediatore funzionale dell’attivazione stromale e di segnali infiammatori associati alla matrice.

Biglycan Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BGN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BGN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BGN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BGN interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.