Bex1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404292-ACT

BEX1 (brain expressed X-linked 1) codifica la proteina Bex1, un fattore adattatore di tipo intrinsecamente disordinato, arricchito nei tessuti neurali, che modula programmi trascrizionali e la trasduzione del segnale legati alla differenziazione neuronale, alla sopravvivenza e alle risposte allo stress. Bex1 è stata implicata nella regolazione della progressione del ciclo cellulare e dell’apoptosi tramite interazioni con vie quali la segnalazione delle neurotrofine e processi associati a MAPK/ERK, con effetti dipendenti dal contesto su proliferazione e differenziazione. Un’alterazione dell’espressione di BEX1 è stata riportata in molteplici tipi di tumore e in studi di biologia neuroevolutiva e neurodegenerativa, a supporto del suo impiego come marcatore e nodo meccanicistico nella ricerca sulla specificazione di linea e sulla plasticità cellulare. Queste proprietà rendono BEX1 rilevante per analizzare reti regolatorie geniche che accoppiano lo stato di differenziazione al controllo della crescita.

Bex1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BEX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Bex1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BEX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BEX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Bex1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BEX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Bex1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Bex1 nelle cellule tumorali con espressione di BEX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.