beta Arrestin 1 Plasmide Double Nickase (m): sc-430955-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- beta Arrestin 1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il beta Arrestin 1 Double Nickase Plasmid (m) e il beta Arrestin 1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Arrb1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: beta Arrestin 1 Antibody (25-G10): sc-53780
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
beta Arrestin 1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430955-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Arrb1 codifica la beta-arrestina 1, un adattatore multifunzionale che regola la desensibilizzazione, l’internalizzazione e il trafficking dei recettori accoppiati a proteine G (GPCR), fungendo al contempo da piattaforma di assemblaggio per complessi di segnalazione. Oltre al classico disaccoppiamento del recettore, la beta-arrestina 1 coordina cascate chinasi, incluse MAPK/ERK, e può influenzare la segnalazione PI3K–AKT e NF-κB, collegando l’attività dei recettori di membrana a risposte trascrizionali e del citoscheletro. Attraverso queste interazioni di via, Arrb1 contribuisce al controllo della migrazione cellulare, della segnalazione infiammatoria e della reattività del sistema nervoso e immunitario. Alterazioni della segnalazione dipendente dalle arrestine sono state associate a una disregolazione delle reti di segnalazione recettoriale rilevanti per la biologia del cancro, la regolazione metabolica e i processi neuroinfiammatori, rendendo Arrb1 un nodo utile per interrogare le vie di segnalazione in modelli murini.
beta Arrestin 1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Arrb1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Arrb1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Arrb1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Arrb1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.