BDNF Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419319-ACT

Il gene murino **Bdnf** codifica il fattore neurotrofico derivato dal cervello (BDNF), una neurotrofina secreta che si lega a TRKB/NTRK2 e a p75NTR per regolare la sopravvivenza neuronale, la differenziazione, la plasticità sinaptica e il rimodellamento dei circuiti dipendente dall’attività. La segnalazione del BDNF attiva le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ per modulare programmi trascrizionali, la dinamica delle spine dendritiche e il rilascio di neurotrasmettitori. Nel sistema nervoso centrale, il BDNF è fondamentale per i processi di apprendimento e memoria e contribuisce alla plasticità dipendente dall’esperienza. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di **Bdnf** sono state associate a fenotipi neurosviluppativi e neuropsichiatrici e sono ampiamente studiate in modelli di neurodegenerazione, risposta allo stress e regolazione metabolica.

BDNF Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Bdnf senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BDNF Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Bdnf nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Bdnf, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BDNF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Bdnf nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BDNF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BDNF nelle cellule tumorali con espressione di Bdnf silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.