Plásmido CRISPR de Activación (h) BCMA: sc-403058-ACT

TNFRSF17 codifica el antígeno de maduración de células B (BCMA), un miembro de la superfamilia de receptores del TNF que se expresa predominantemente en células B en etapas tardías y en células plasmáticas. BCMA funciona como receptor de APRIL (TNFSF13) y BAFF (TNFSF13B), acoplando la unión del ligando a NF-κB y a programas de señalización de supervivencia relacionados que favorecen la diferenciación de las células plasmáticas, la producción de inmunoglobulinas y una inmunidad humoral duradera. La desregulación de la señalización y la expresión de BCMA se asocia estrechamente con una homeostasis anómala de las células plasmáticas y se estudia con frecuencia en el contexto del mieloma múltiple y otras neoplasias de la línea B. Como receptor restringido a un linaje, BCMA también se utiliza como una herramienta molecular para investigar la biología de las células plasmáticas, la regulación inmunitaria y las interacciones entre el tumor y el microambiente.

BCMA El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TNFRSF17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BCMA El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TNFRSF17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TNFRSF17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BCMA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TNFRSF17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BCMA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BCMA en células tumorales con expresión de TNFRSF17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.