BAZ2B Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-436575-LAC

BAZ2B (proteina 2B con dominio bromodominio adiacente a un dominio a dita di zinco) è un fattore nucleare associato alla cromatina che riconosce gli istoni acetilati tramite il suo bromodominio e contribuisce alla regolazione dei programmi trascrizionali attraverso meccanismi epigenetici. È collegata al rimodellamento della cromatina dipendente da ATP e può influenzare gli stati di espressione genica coinvolti nell’identità cellulare, nella proliferazione e nella differenziazione. Nei sistemi murini, Baz2b è stata utilizzata per studiare come le proteine “reader” della cromatina plasmino reti trascrizionali di sviluppo e specifiche di tessuto e come la loro deregolazione alteri la regolazione del genoma. La regolazione alterata dei fattori della cromatina contenenti bromodominio è ampiamente rilevante per la biologia del cancro e per fenotipi del neurosviluppo, rendendo Baz2b un nodo utile per indagini a livello di via sulla regolazione genica guidata dalla cromatina.

Le particelle di attivazione lentivirale BAZ2B (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Baz2b in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BAZ2B (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Baz2b, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BAZ2B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Baz2b e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.