basonuclin Plasmide Double Nickase (h): sc-405917-NIC

BNC1 codifica la basonuclina, un fattore di trascrizione a dita di zinco arricchito negli epiteli stratificati e in tipi cellulari associati alla linea germinale, dove sostiene programmi legati alla proliferazione e alla differenziazione. La basonuclina si localizza nel nucleo ed è stata implicata nella regolazione della trascrizione dell’RNA ribosomiale e di reti più ampie di espressione genica che influenzano la crescita dei cheratinociti e l’omeostasi tissutale. Attraverso questi ruoli trascrizionali, BNC1 interseca vie che controllano la progressione del ciclo cellulare, lo stato della cromatina e la maturazione epiteliale. Un’alterazione dell’espressione di BNC1 o il suo silenziamento epigenetico sono stati riportati in molteplici contesti tumorali, rendendolo un locus utile per studiare la deregolazione trascrizionale in modelli legati al cancro.

basonuclin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BNC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BNC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BNC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BNC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.