ATP11B Double Nickaseプラスミド (h): sc-411692-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ATP11B Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ATP11Bダブルニカースプラスミド（h）およびATP11Bダブルニカースプラスミド（h2）は、ATP11Bを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ATP11B Double Nickaseプラスミド (h) | sc-411692-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP11B Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-411692-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP11Bは、アミノリン脂質を脂質二重膜の片側からもう一方へ移動させることで膜脂質の非対称性を維持し、小胞形成、膜輸送、オルガネラの恒常性を支えるP4-ATPase型リン脂質フリッパーゼをコードします。ATP11Bはエンドソームおよびゴルジ体に関連する輸送過程に関与することで、受容体の局在や細胞内シグナル伝達に影響を与える選別・リサイクリング経路に寄与します。脂質移動ダイナミクスの破綻は、細胞極性、ストレス応答、膜依存的な輸送を変化させ得るため、ATP11Bはプロテオスタシスやトラフィッキング関連表現型の研究において重要です。文献上、ATP11Bの発現量や機能の変化は薬物輸送／薬物処理や細胞のストレス耐性の変化と関連づけられており、がん生物学および化学療法抵抗性モデルにおける機構解析を促す要因となっています。
ATP11B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATP11B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATP11B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATP11Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATP11Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。