Atg16 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-429488-ACT

マウスAtg16l1は、LC3の脂質化とファゴフォアの伸長を介してオートファゴソーム形成を統括するATG12–ATG5–ATG16L1複合体の中核構成因子であるAtg16をコードします。本タンパク質は、上流の栄養・ストレスシグナルを選択的オートファジーおよびバルク（非選択的）オートファジーへとつなぎ、ミトコンドリア品質管理、抗菌応答、炎症性シグナルの出力を形作ります。ATG16L1機能の変化は腸管バリアの生物学や自然免疫制御と関連しており、宿主—微生物相互作用、炎症表現型、細胞内在性のストレス適応の研究において重要です。実験系では、Atg16l1の撹乱によりオートファジーフラックスや下流のサイトカイン経路が変調され得るため、オートファジー依存的な恒常性維持の機序解明に役立ちます。

Atg16 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Atg16l1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Atg16 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Atg16l1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAtg16l1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Atg16の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAtg16l1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAtg16依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAtg16l1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAtg16経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。