ATF4 Plasmide Double Nickase (m): sc-419228-NIC

Il gene Atf4 del topo codifica l’Activating Transcription Factor 4 (ATF4), un fattore di trascrizione bZIP che coordina programmi di risposta integrata allo stress, controllando il metabolismo degli amminoacidi, l’equilibrio redox e la proteostasi. ATF4 viene indotto a valle della fosforilazione di eIF2α e interagisce con la segnalazione dello stress del RE/UPR per regolare geni coinvolti in autofagia, funzione mitocondriale e rimodellamento trascrizionale adattativo. Attraverso queste vie, ATF4 modula le decisioni di sopravvivenza cellulare in condizioni di carenza di nutrienti, stress ossidativo e ipossia, con ampia rilevanza per neurodegenerazione, disfunzioni metaboliche, infiammazione e biologia tumorale. Un’alterazione dell’attività di Atf4 è inoltre associata a cambiamenti nella differenziazione degli osteoblasti e nell’omeostasi scheletrica, a supporto del suo impiego in modelli di sviluppo e di stress tissutale.

ATF4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Atf4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Atf4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Atf4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Atf4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.