ATF-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416662-ACT

L’ATF2 umano codifica l’Activating Transcription Factor 2 (ATF-2), un fattore di trascrizione bZIP attivato da chinasi sensibili allo stress, tra cui JNK e p38 MAPK. In seguito alla fosforilazione, ATF-2 regola programmi genici inducibili che controllano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA, l’infiammazione e l’apoptosi, spesso tramite eterodimerizzazione con membri della famiglia AP-1 e integrazione della segnalazione MAPK. L’attività di ATF-2 interseca la regolazione della cromatina e la trascrizione immediate-early, influenzando programmi dipendenti dal contesto nella segnalazione immunitaria e nell’adattamento cellulare allo stress genotossico e ossidativo. Una segnalazione di ATF-2 deregolata è stata associata a fenotipi alterati di proliferazione e risposta allo stress riportati in diversi modelli di cancro e di malattie infiammatorie, supportandone l’uso come nodo meccanicistico negli studi di pathway.

ATF-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ATF2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ATF-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ATF2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ATF2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ATF-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ATF2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ATF-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ATF-2 nelle cellule tumorali con espressione di ATF2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.