ASCL1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402039-LAC

ASCL1 (achaete-scute family bHLH transcription factor 1) è un regolatore proneurale di tipo basic helix–loop–helix che si lega ai motivi E-box per controllare l’impegno verso la linea neuronale, l’uscita dal ciclo cellulare e i programmi di differenziamento durante la neurogenesi umana. Opera all’interno di reti trascrizionali che coinvolgono la segnalazione NOTCH, la repressione mediata da REST e il rimodellamento della cromatina, coordinando gli stati di espressione genica neuroendocrini e neuronali. Un’attività di ASCL1 deregolata è associata a un’anomala plasticità di linea e a fenotipi di differenziamento neuroendocrino osservati in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo utile per studiare le transizioni di stato guidate dai fattori di trascrizione. ASCL1 è quindi ampiamente utilizzato per modellare la riprogrammazione neuronale, le vie del neurosviluppo e i meccanismi che collegano i segnali di differenziamento al controllo della proliferazione.

Le particelle di attivazione lentivirale ASCL1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ASCL1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ASCL1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ASCL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ASCL1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ASCL1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.