Arp3β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402186-ACT

ACTR3B codifica per Arp3β, una proteina correlata all’actina che si ritiene contribuisca al rimodellamento dinamico del citoscheletro di actina, supportando processi quali il controllo della forma cellulare, la formazione di ruffle di membrana, l’endocitosi e la migrazione cellulare. Nell’ambito di reti regolatorie dell’actina collegate alla nucleazione dipendente da Arp2/3 e all’assemblaggio dell’actina ramificata, Arp3β può influenzare l’organizzazione dell’actina corticale e le risposte del citoscheletro a segnali extracellulari. L’alterazione delle vie di polimerizzazione dell’actina è ampiamente rilevante per i meccanismi alla base del comportamento invasivo, delle modifiche dell’adesione e della deregolazione del traffico intracellulare osservati in molteplici contesti patologici. L’espressione di ACTR3B e la sua modulazione funzionale costituiscono quindi punti d’ingresso utili per studiare fenotipi incentrati sul citoscheletro e la connettività delle vie di segnalazione in modelli cellulari umani.

Arp3β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ACTR3B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Arp3β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ACTR3B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ACTR3B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Arp3β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ACTR3B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Arp3β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Arp3β nelle cellule tumorali con espressione di ACTR3B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.