ARID3A Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-404552-LAC-2

ARID3A umano codifica un fattore di trascrizione legante il DNA della famiglia dei domini di interazione con regioni ricche in AT (AT-rich interaction domain), che regola l’accessibilità della cromatina e programmi di espressione genica specifici del tipo cellulare. ARID3A è implicato nello sviluppo e nell’attivazione delle cellule B, nella modulazione della trascrizione responsiva agli interferoni e nel coordinamento di reti trascrizionali legate a differenziamento e proliferazione. Un’espressione deregolata di ARID3A e un’alterata attività regolatoria sono state associate a disfunzioni immunitarie e a stati trascrizionali connessi alla malignità, inclusi contesti rilevanti per neoplasie ematologiche e fenotipi autoimmuni. L’editing genetico di ARID3A consente studi meccanicistici sul controllo enhancer–promoter, sull’impegno di linea e sugli output di segnalazione guidati da citochine, supportando screening di genomica funzionale e la mappatura di vie di segnalazione in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale ARID3A (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ARID3A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ARID3A (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ARID3A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ARID3A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ARID3A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.