ARH1 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-410678-ACT-2

ヒトADPRHはADPリボシルアルギニン加水分解酵素1（ARH1）をコードしており、ARH1は細胞質に局在する酵素として、タンパク質上のアルギニン残基に付加されたモノADPリボースを除去することでアルギニン特異的なADPリボシル化を可逆的にし、細胞内のADPリボース代謝回転を調節している。ART（ADPリボシル基転移酵素）による修飾に拮抗することで、ARH1はNAD⁺依存的なモノADPリボシル化経路の枠組みの中で、ストレス応答、シグナル伝達、タンパク質恒常性の制御に寄与する。ADPRHが関与するADPリボシル化ダイナミクスの破綻は、毒素による修飾に対する感受性の変化や、実験系において腫瘍抑制および炎症性シグナルに関連する表現型と結び付けられている。ADPRHの遺伝子編集は、可逆的ADPリボシル化の作用機序、DNA損傷応答や免疫シグナルネットワークとの経路クロストーク、ならびに翻訳後修飾の制御を検討する機能ゲノミクススクリーニングの実施を可能にする。

ARH1 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADPRHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARH1 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における ADPRH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADPRH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARH1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADPRH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARH1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADPRH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARH1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。