ARF3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402706-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARF3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARF3 Double Nickase Plasmid (h) e il ARF3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARF3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARF3 Antibody (41): sc-135841
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARF3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402706-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARF3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402706-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il fattore di ADP-ribosilazione 3 (ARF3) è una piccola GTPasi della famiglia ARF che regola il traffico vescicolare controllando il reclutamento delle proteine di rivestimento, la curvatura di membrana e il metabolismo dei fosfolipidi nel sistema del Golgi e degli endosomi. L’alternanza tra gli stati legati a GDP e a GTP collega ARF3 al trasporto secretorio ed endocitico, incluso il traffico retrogrado mediato da COPI e il coordinamento dello smistamento dei carichi. Attraverso i suoi ruoli nella dinamica di membrana e nella segnalazione sulle membrane intracellulari, ARF3 influenza processi quali il riciclo dei recettori, la secrezione proteica e l’organizzazione del citoscheletro. La deregolazione della segnalazione della famiglia ARF e delle vie di traffico è stata associata ad alterazioni della migrazione cellulare, della proliferazione e delle risposte allo stress, rendendo ARF3 un bersaglio utile per studi meccanicistici di fenotipi legati al traffico in modelli rilevanti per la malattia.
ARF3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARF3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARF3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARF3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARF3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.