Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ARF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401608-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ARF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ARF1 Double Nickase Plasmid (h) e il ARF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ARF1 Antibody (ARFS 1A9/5): sc-53168
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ARF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401608-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ARF1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401608-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il fattore di ADP-ribosilazione 1 (ARF1) è una piccola GTPasi che alterna ciclicamente gli stati legati a GDP e a GTP per regolare il traffico di membrana e la dinamica degli organelli, in particolare a livello dell'apparato di Golgi e del sistema endosomiale. ARF1 attivo recluta proteine del rivestimento (coat) e adattatori per guidare la gemmazione delle vescicole, coordina il metabolismo dei fosfoinositidi e supporta il rimodellamento del citoscheletro tramite effettori a valle. Attraverso questi ruoli, ARF1 contribuisce al flusso della via secretoria, al riciclo dei recettori e alla trasduzione del segnale collegata alla crescita e alla migrazione cellulare. Un traffico dipendente da ARF1 deregolato è stato associato, in modelli di cancro, a proliferazione alterata e a fenotipi invasivi, nonché, in contesti rilevanti per la malattia, a perturbazioni della funzione di neuroni e cellule immunitarie.
ARF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.