APPL1 Plasmide Double Nickase (m): sc-428481-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- APPL1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il APPL1 Double Nickase Plasmid (m) e il APPL1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Appl1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: APPL1 Antibody (A-1): sc-271901
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
APPL1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428481-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APPL1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-428481-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Appl1 codifica APPL1, una proteina adattatrice endosomiale che lega Rab5 e integra la segnalazione dei recettori tirosin-chinasici con le vie a valle PI3K–AKT e MAPK. Attraverso interazioni con i recettori dell’adiponectina e con componenti della segnalazione insulinica, APPL1 contribuisce alla regolazione dell’assorbimento di glucosio, del metabolismo lipidico e delle risposte di crescita cellulare. APPL1 partecipa anche al traffico endocitico e alla compartimentalizzazione dei segnali, influenzando programmi di sopravvivenza, migrazione e segnalazione neuronale. In letteratura, una segnalazione alterata legata ad APPL1 è stata associata a fenotipi metabolici e a risposte modificate ai fattori di crescita, a supporto della sua rilevanza negli studi sulla resistenza all’insulina, sulle vie legate all’obesità e sui meccanismi di malattia guidati dalla segnalazione.
APPL1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Appl1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Appl1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Appl1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Appl1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.