APOBEC3A Plasmide Double Nickase (h): sc-418267-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- APOBEC3A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il APOBEC3A Double Nickase Plasmid (h) e il APOBEC3A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APOBEC3A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
APOBEC3A Plasmide Double Nickase (h) | sc-418267-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APOBEC3A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418267-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’APOBEC3A umano codifica una deaminasi della citidina su DNA a singolo filamento appartenente alla famiglia APOBEC, che catalizza l’editing da C a U e può generare mutazioni attraverso i processi di replicazione e di riparazione per escissione di basi. APOBEC3A è indotto dalla segnalazione dell’immunità innata, incluse le vie dell’interferone, e contribuisce alla difesa cellulare contro i genomi virali e i retroelementi endogeni. La sua attività si interseca con la risposta al danno al DNA e con i processi di mantenimento del genoma, e un’espressione deregolata o un errato indirizzamento è associato a caratteristiche firme mutazionali osservate in molteplici tipi di tumore. Di conseguenza, APOBEC3A è ampiamente studiato per i suoi ruoli nella restrizione antivirale, nella mutagenesi associata all’infiammazione e nei meccanismi di instabilità genomica.
APOBEC3A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APOBEC3A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APOBEC3A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APOBEC3A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APOBEC3A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.