APLNR Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423839-ACT

Il gene murino **Aplnr** codifica il recettore dell’apelina (APLNR), un GPCR di classe A che lega i peptidi dell’apelina e **ELABELA/Toddler** per regolare la segnalazione dipendente da proteine G, inclusa la modulazione del cAMP, i flussi intracellulari di Ca2+, e le vie PI3K–AKT e MAPK/ERK. L’attività di APLNR influenza la funzione endoteliale e della muscolatura liscia vascolare, le risposte angiogeniche, lo sviluppo e il rimodellamento cardiaco, e l’omeostasi dei fluidi attraverso un controllo integrato di migrazione, proliferazione e proprietà di barriera. Nei sistemi nervoso e metabolico, la segnalazione APLNR è stata collegata all’accoppiamento neurovascolare e al bilancio energetico, collocando **Aplnr** come nodo meccanicistico che connette programmi di sviluppo e adattamento allo stress. Un’attività deregolata della via APLNR è associata a fenotipi cardiometabolici, disfunzione vascolare e angiogenesi associata ai tumori, rendendola rilevante per la mappatura delle vie di segnalazione nei modelli di malattia.

APLNR Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Aplnr senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

APLNR Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Aplnr nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Aplnr, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di APLNR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Aplnr nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da APLNR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via APLNR nelle cellule tumorali con espressione di Aplnr silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.