APLNR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402374-ACT

APLNR codifica il recettore dell’apelina (noto anche come APJ), un recettore accoppiato a proteine G di classe A attivato dai ligandi peptidici apelina ed ELA/Toddler. La segnalazione di APLNR regola lo sviluppo vascolare e la funzione endoteliale, con il coinvolgimento a valle di vie come PI3K–AKT, ERK/MAPK, la mobilizzazione del calcio e la produzione di ossido nitrico, che modellano programmi angiogenici, metabolici e contrattili. Oltre ai ruoli nell’omeostasi cardiovascolare e dei fluidi, l’attività di APLNR è stata collegata alla modulazione della migrazione cellulare e della segnalazione infiammatoria in molteplici contesti tissutali. Una segnalazione deregolata dell’asse APLNR–apelina è associata a fenotipi cardiometabolici ed è stata studiata nel rimodellamento vascolare e nella biologia del microambiente tumorale, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici.

APLNR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di APLNR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

APLNR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus APLNR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione APLNR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di APLNR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus APLNR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da APLNR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via APLNR nelle cellule tumorali con espressione di APLNR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.