Apelin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401548-ACT

APLNは、APJ受容体（APLNR）の分泌性ペプチドリガンドであるアペリンをコードしており、Gタンパク質共役型シグナル伝達を介して血管トーン、血管新生、体液恒常性を調節します。アペリン–APJの活性化は、PI3K/AKT、ERK/MAPK、eNOS/NOなどの経路を動員し、内皮機能、心筋収縮能、ならびに複数組織における代謝適応に影響を与えます。APLN発現の異常は、心血管リモデリング、肺血管疾患、そして肥満や糖尿病関連の状況におけるエネルギーバランスの変化と関連づけられています。腫瘍生物学においては、アペリンシグナルが低酸素応答や新生血管形成を調節し得るため、増殖と灌流の微小環境制御に関する研究で重要性を持ちます。

Apelin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性APLNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Apelin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における APLN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAPLN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Apelinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAPLN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるApelin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAPLN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるApelin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。