ANT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400679-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ANT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ANT1 Double Nickase Plasmid (h) e il ANT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC25A4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ANT1 Antibody (E-7): sc-518268
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ANT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400679-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ANT1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400679-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC25A4 codifica la translocasi dei nucleotidi adenilici 1 (ANT1), un trasportatore della membrana mitocondriale interna che scambia ADP e ATP attraverso la membrana mitocondriale, accoppiando la fosforilazione ossidativa alla richiesta energetica citosolica. ANT1 è fondamentale per la bioenergetica mitocondriale, il mantenimento del potenziale di membrana e la regolazione della transizione di permeabilità e dell’apoptosi, collegandosi così alle risposte allo stress e al controllo qualità dei mitocondri. Alterazioni della funzione di ANT1 sono state associate a fenotipi neuromuscolari e metabolici, incluse miopatie mitocondriali e vie correlate alla cardiomiopatia, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio del metabolismo energetico specifico dei tessuti. Nelle cellule umane, ANT1 interagisce inoltre con reti più ampie di trasportatori mitocondriali che modulano l’equilibrio redox e la segnalazione delle specie reattive dell’ossigeno.
ANT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC25A4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC25A4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC25A4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC25A4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.