Annexin III Plasmide Double Nickase (h): sc-403572-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Annexin III Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Annexin III Double Nickase Plasmid (h) e il Annexin III Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ANXA3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Annexin III Antibody (G-1): sc-390700
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Annexin III Plasmide Double Nickase (h) | sc-403572-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Annexin III Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403572-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANXA3 codifica l’Annexina III, una proteina Ca²⁺-dipendente che si lega ai fosfolipidi e si associa alle membrane cellulari per regolare il traffico vescicolare, l’organizzazione della membrana e i processi collegati al citoscheletro. L’Annexina III è stata implicata in reti di segnalazione connesse alle risposte infiammatorie e allo stress ossidativo e può influenzare proliferazione, migrazione e sopravvivenza cellulari attraverso una modulazione dipendente dal contesto della segnalazione prossima alla membrana. Un’espressione alterata di ANXA3 è stata riportata in molteplici ambiti di ricerca oncologica e immunologica, dove viene studiata come fattore che contribuisce alla biologia tumorale, a fenotipi associati alla chemioresistenza e alla funzione delle cellule mieloidi. Queste caratteristiche rendono ANXA3 un bersaglio utile per analizzare le dinamiche di membrana e le vie di segnalazione rilevanti per i meccanismi di malattia in modelli cellulari umani.
Annexin III Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ANXA3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ANXA3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ANXA3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ANXA3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.