ANKRD5 Plasmide Double Nickase (h): sc-408943-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ANKRD5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ANKRD5 Double Nickase Plasmid (h) e il ANKRD5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ANKEF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ANKRD5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408943-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ANKRD5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-408943-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANKEF1 codifica una proteina contenente ripetizioni di anchirina ed è collegato alla nomenclatura ANKRD5, un’architettura di domini comunemente associata a interazioni proteina-proteina che organizzano complessi multiproteici nel citoplasma e nel nucleo. Sebbene ANKEF1/ANKRD5 rimanga caratterizzato in modo incompleto, le proteine con ripetizioni di anchirina modulano spesso la trasduzione del segnale, l’organizzazione del citoscheletro e il turnover dipendente dall’ubiquitina, fungendo da impalcature (scaffold) o adattatori. Studi di espressione e genetici hanno implicato questo locus in programmi regolatori che influenzano lo stato cellulare e le risposte allo stress, rendendolo rilevante per indagini meccanicistiche sul cablaggio delle vie di segnalazione nelle cellule umane. La ricerca in corso esplora possibili associazioni con fenotipi legati a malattie attraverso una connettività di rete alterata, più che tramite una singola attività enzimatica definita.
ANKRD5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ANKEF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ANKEF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ANKEF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ANKEF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.