AIF Plasmide Double Nickase (h): sc-400370-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AIF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AIF Double Nickase Plasmid (h) e il AIF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AIFM1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AIF Antibody (E-1): sc-13116
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AIF Plasmide Double Nickase (h) | sc-400370-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AIF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400370-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’AIFM1 umano codifica l’Apoptosis-Inducing Factor, mitochondrion-associated 1 (AIF), una flavoproteina ossidoreduttasi localizzata nello spazio intermembrana mitocondriale che supporta la funzione della catena respiratoria e l’omeostasi redox. In condizioni di forte stress cellulare, AIF può traslocare nel nucleo e promuovere la morte cellulare indipendente dalle caspasi attraverso frammentazione del DNA su larga scala e condensazione della cromatina. AIFM1 è quindi centrale nel controllo di qualità mitocondriale, nelle risposte allo stress ossidativo e nelle vie di morte cellulare programmata che si intrecciano con il fallimento bioenergetico e con fenotipi neurodegenerativi. La disregolazione genetica e funzionale di AIFM1 è stata collegata a encefalomiopatie mitocondriali, neuropatie periferiche e, più in generale, a contesti in cui la fosforilazione ossidativa compromessa e un’alterata segnalazione apoptotica contribuiscono alla biologia della malattia.
AIF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AIFM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AIFM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AIFM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AIFM1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.