ADSL Plasmide Double Nickase (h): sc-404936-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADSL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADSL Double Nickase Plasmid (h) e il ADSL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADSL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADSL Antibody (C-11): sc-365623
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADSL Plasmide Double Nickase (h) | sc-404936-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADSL Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404936-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’adenilosuccinato liasi (ADSL) è un enzima bifunzionale della biosintesi de novo delle purine che catalizza la conversione dell’adenilosuccinato in AMP e del SAICAR in AICAR, collegando il metabolismo dei nucleotidi all’equilibrio energetico cellulare e alla capacità proliferativa. Regolando i pool di nucleotidi purinici e degli intermedi di via, l’attività di ADSL influenza la sintesi di DNA/RNA, le risposte allo stress replicativo e la segnalazione metabolica nelle cellule in rapida divisione. Varianti con perdita di funzione di ADSL nell’uomo alterano l’omeostasi delle purine e sono associate alla carenza di adenilosuccinato liasi, un disturbo neurometabolico caratterizzato dall’accumulo di succinilpurine e da un neurosviluppo compromesso. In ambito di ricerca, ADSL viene studiata per analizzare la dinamica dei purinosomi, il controllo metabolico dell’espressione genica e il contributo delle alterazioni della via delle purine ai fenotipi cellulari di stress.
ADSL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADSL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADSL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADSL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADSL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.