ADK Plasmide Double Nickase (h): sc-403273-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADK Double Nickase Plasmid (h) e il ADK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADK Antibody (H-1): sc-514588
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADK Plasmide Double Nickase (h) | sc-403273-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADK Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403273-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’adenosina chinasi (ADK) è un regolatore chiave della via di recupero delle purine: fosforila l’adenosina a AMP, controllando così la disponibilità intracellulare di adenosina e influenzando il pool di adenilati. Modulando il metabolismo dell’adenosina, ADK incide sull’omeostasi energetica e su processi di segnalazione legati al turnover dei nucleotidi e alle risposte allo stress. Un’alterata attività di ADK può spostare le vie dipendenti dall’adenosina che influenzano l’infiammazione, la segnalazione neuromodulatoria e l’eccitabilità cellulare, rendendola rilevante per studi su fenotipi neurologici e metabolici. Nei sistemi umani, ADK è spesso utilizzata come nodo per indagare come il metabolismo delle purine si interfacci con cambiamenti dello stato cellulare in condizioni di ipossia, stress ossidativo o funzione mitocondriale alterata.
ADK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.