ADAR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401611-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADAR1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADAR1 Double Nickase Plasmid (h) e il ADAR1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADAR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADAR1 Antibody (D-8): sc-271854
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADAR1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401611-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAR1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401611-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADAR codifica ADAR1, una deaminasi dell’adenosina inducibile dall’interferone che catalizza l’editing dell’RNA da A a I all’interno di strutture di RNA a doppio filamento, rimodellando sequenze codificanti, splicing, stabilità dell’RNA e targeting dei miRNA. Modificando il dsRNA endogeno, ADAR1 limita l’attivazione aberrante di sensori dell’immunità innata come MDA5/MAVS e della conseguente segnalazione dell’interferone di tipo I, contribuendo a mantenere la distinzione tra self e non-self. ADAR1 influenza anche l’elaborazione dell’RNA nelle risposte allo stress e può modulare gli esiti della traduzione tramite l’editing di elementi ripetitivi e trascritti strutturati. Un’attività di ADAR1 deregolata o uno squilibrio dell’editing dell’RNA sono stati associati a interferonopatie, fenotipi infiammatori e alterate interazioni tumore–sistema immunitario, rendendolo un nodo chiave per lo studio della sorveglianza dell’RNA e dell’omeostasi dell’immunità innata.
ADAR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADAR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADAR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADAR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADAR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.