ACTG1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400006-NIC

ACTG1 codifica l’actina gamma 1 citoplasmatica, un componente fondamentale del citoscheletro di actina che sostiene la forma cellulare, la tensione corticale e la generazione di forza. ACTG1 partecipa alla polimerizzazione e al rimodellamento dei filamenti di actina, alla base di processi quali migrazione cellulare, adesione, citocinesi e meccanotrasduzione, integrandosi con la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e con reti di proteine leganti l’actina. Nella biologia umana, alterazioni delle dinamiche del citoscheletro dipendenti da ACTG1 possono modificare il traffico intracellulare e l’architettura cellulare, rendendolo rilevante per studi sullo sviluppo dei tessuti e sulle risposte allo stress. Varianti genetiche o disregolazioni che coinvolgono ACTG1 sono state associate a fenotipi legati al citoscheletro, incluse forme di ipoacusia neurosensoriale e disturbi caratterizzati da motilità e struttura cellulari alterate.

ACTG1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACTG1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACTG1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACTG1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACTG1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.