AAK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-406073-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AAK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AAK1 Double Nickase Plasmid (h) e il AAK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AAK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AAK1 Antibody (LW-M11): sc-134242
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AAK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406073-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AAK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406073-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AAK1 (chinasi 1 associata ad AP2) è una chinasi serina/treonina che fosforila componenti del complesso adattatore AP2 per regolare l’endocitosi mediata da clatrina e il traffico di membrana. Coordinando l’internalizzazione del carico e il riciclo dei recettori, AAK1 influenza la dinamica di segnalazione di vie quali EGFR e i GPCR e modula le risposte cellulari a valle. Interagisce inoltre con i processi di smistamento endosomiale e di formazione delle vescicole, che incidono sull’assorbimento di nutrienti, sul ciclo delle vescicole sinaptiche e sulla segnalazione dell’immunità innata. Alterazioni dell’attività di AAK1 e del controllo endocitico sono state associate a segnalazione deregolata e a fenotipi rilevanti per la biologia del cancro e per la ricerca in ambito neurologico e delle malattie infettive.
AAK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AAK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AAK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AAK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AAK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.