A1BG Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403087-ACT

La glicoproteina alfa-1B (A1BG) codifica una glicoproteina plasmatica secreta appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, abbondante in circolo e rilevabile in numerosi tessuti. Sebbene la sua funzione molecolare precisa non sia ancora completamente definita, A1BG è implicata in interazioni extracellulari proteina–proteina e nella modulazione di processi immunitari e infiammatori, con associazioni riportate a stress ossidativo e a segnali legati alla proteostasi nel compartimento extracellulare. Un’alterata espressione di A1BG è stata osservata in diversi contesti patologici, inclusi stati metabolici e infiammatori e vari tumori, a supporto del suo impiego come gene associato a biomarcatori per studi meccanicistici. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di A1BG offre un approccio per interrogare i pathway che regolano le reti di glicoproteine secrete, l’infiammazione sistemica e la segnalazione microambientale associata ai tumori.

A1BG Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di A1BG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

A1BG Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus A1BG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione A1BG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di A1BG. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus A1BG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da A1BG nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via A1BG nelle cellule tumorali con espressione di A1BG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.