4E-BP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400398-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 4E-BP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il 4E-BP1 Double Nickase Plasmid (h) e il 4E-BP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF4EBP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: 4E-BP1 Antibody (P-1): sc-9977
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
4E-BP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400398-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
4E-BP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400398-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4EBP1 codifica 4E-BP1, un inibitore della traduzione cap-dipendente regolato dalla fosforilazione, che si lega a EIF4E e limita l’assemblaggio del complesso di inizio EIF4F. La fosforilazione di 4E-BP1 mediata da mTORC1 libera EIF4E, promuovendo la sintesi proteica e collegando il rilevamento di nutrienti e fattori di crescita al controllo della traduzione, alla crescita cellulare e all’adattamento metabolico. Questo nodo integra la segnalazione PI3K–AKT–mTOR con programmi di risposta allo stress e influenza l’espressione di mRNA oncogenici e pro-sopravvivenza. Alterazioni dell’abbondanza di 4E-BP1 o del suo stato di fosforilazione sono frequentemente associate a proliferazione e metabolismo disregolati nella biologia del cancro e in altri disturbi correlati alla via di mTOR.
4E-BP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF4EBP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF4EBP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF4EBP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF4EBP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.