α_1A-AR Plasmide Double Nickase (h): sc-401726-NIC

ADRA1A codifica il recettore adrenergico alfa1A umano (α1A-AR), un recettore accoppiato a proteina G (GPCR) che si accoppia principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, la mobilizzazione di Ca2+ dipendente dall’inositolo trisfosfato e l’attivazione della protein chinasi C. Attraverso queste vie, α1A-AR regola la contrazione della muscolatura liscia, il tono vascolare e la neurotrasmissione, con effetti a valle sulla segnalazione MAPK/ERK e su risposte trascrizionali più ampie. L’espressione di ADRA1A e l’equilibrio della sua segnalazione contribuiscono al controllo adrenergico della fisiologia cardiovascolare e urogenitale, e la sua disregolazione è rilevante in condizioni caratterizzate da segnalazione simpatica alterata e rimodellamento tissutale. In quanto GPCR di membrana con output di secondi messaggeri ben definiti, viene comunemente utilizzato per studiare la desensibilizzazione recettoriale, la segnalazione “biased” (selettiva) e il cross-talk con altri GPCR e con vie attivate da fattori di crescita.

α1A-AR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADRA1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADRA1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADRA1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADRA1A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.