ZPR1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423774-ACT

ZPR1 (proteina a dita di zinco ZPR1) è una proteina evolutivamente conservata, capace di legare l’RNA e contenente domini a dita di zinco, implicata nel controllo trascrizionale, nel metabolismo dell’RNA e nella segnalazione responsiva ai fattori di crescita. Nelle cellule di topo, ZPR1 partecipa al traffico nucleo–citoplasma e si associa a complessi di processamento dell’RNA, collegando segnali mitogenici a programmi di espressione genica che supportano la proliferazione e le risposte allo stress cellulare. Studi funzionali collegano ZPR1 alla biologia dei motoneuroni e a vie rilevanti per l’atrofia muscolare spinale attraverso la sua relazione con l’assemblaggio di ribonucleoproteine associate a SMN e con le dinamiche dello splicing dell’RNA. La disregolazione delle reti regolatorie dell’RNA dipendenti da ZPR1 è quindi di interesse per la modellizzazione della neurodegenerazione e per studi meccanicistici sull’accoppiamento tra trascrizione e processamento dell’RNA.

ZPR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Zpr1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZPR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Zpr1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Zpr1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZPR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Zpr1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZPR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZPR1 nelle cellule tumorali con espressione di Zpr1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.