ZPR1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423774-ACT

ZPR1（ジンクフィンガータンパク質ZPR1）は、進化的に保存されたRNA結合性かつジンクフィンガー含有タンパク質であり、転写制御、RNA代謝、ならびに増殖因子応答性シグナル伝達に関与するとされています。マウス細胞では、ZPR1は核—細胞質間輸送に関与し、RNAプロセシング複合体と会合することで、有糸分裂促進性の刺激を、増殖および細胞ストレス応答を支える遺伝子発現プログラムへと結び付けます。機能解析からは、ZPR1がSMN関連リボ核タンパク質の組み立てやRNAスプライシング動態との関係を通じて、運動ニューロンの生物学や脊髄性筋萎縮症（SMA）に関連する経路とも関連することが示されています。そのため、ZPR1依存的なRNA制御ネットワークの破綻は、神経変性のモデル化や、転写とRNAプロセシングの連関機構を解明する研究において重要な関心対象となっています。

ZPR1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Zpr1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ZPR1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Zpr1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZpr1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ZPR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZpr1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZPR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZpr1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZPR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。